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產品簡介:
產品型號:
廠商性質:經銷商
訪問量:2864
更新時間:2024-11-05
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
產品名稱:兔肺小動脈平滑肌細胞
組織來源:肺小動脈
產品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔肺小動脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介:
兔肺小動脈平滑肌分離自肺小動脈組織;小動脈(smallartery),管徑在0.3-1mm之間,小動脈包括粗細不等的幾級分支,也屬肌性動脈。較大的小動脈,內膜有明顯的內彈性膜,中膜有幾層平滑肌,外膜厚度與中膜相近,一般沒有外彈性膜。小動脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素,也是調節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關"。典型的小動脈,其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對比其他動脈為厚,當平滑肌在神經支配下強力收縮時,其管腔可以閉塞,而使血液不能流入它所分布的毛細血管內,從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動脈同時收縮,可使血壓顯著上升。反之,當小動脈的平滑肌舒張時,則可使大量的血液流入毛細血管,外周阻力明顯下降,血壓降低。終末小動脈(terminal arteri-ole)的口徑為20-30μm;后小動脈(metar-teriole),又稱毛細血管前小動脈(precapil-lary arteriole)的口徑為12-15μm。管壁內均有較稀疏的平滑肌,在毛細血管前小動脈分支的起始部分,管壁平滑肌成分增厚,叫做毛細血管前括約?。?span>precapillary sphinc-ter),其收縮或舒張,可調節(jié)真毛細血管的血流量,是調節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關"。
方法簡介:
實驗室分離的兔肺小動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔肺小動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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